HIV-1 Vif的克隆、表达与活性检测

• 作者: 刘徽婷 刘朝奇 汪龚泽 覃晓琳
• 来源期刊: 中国人兽共患病学报
• 学科: 医学
• 关键词: HIV-1 Vif SH3(HCK) 结合
• 年，卷（期）: 2010,（12）
• 页码范围: 1141-1144
• 分类号: R392.11
• 字数: 3126字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-2694.2010.12.015

摘要

目的 克隆HIV-1 Vif基因,构建原核表达质粒,进行蛋白的表达及其生物学活性的检测.方法 PCR扩增Vif基因,并将其克隆到原核表达载体pET28a(+)中,构建原核表达质粒pET28a(+)/Vif,进行双酶切及测序鉴定.获得的阳性质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达,对表达产物进行SDS-PAGE电泳和Western blot检测分析,利用亲和层析方法纯化Vif蛋白.利用Pull-Down方法检测HIV-1 Vif与SH3(HCK)特异性结合活性.结果 通过酶切和测序,结果表明重组质粒pET28a(+)/Vif构建正确.SDS-PAGE和Western blot结果鉴定了原核表达的Vif重组蛋白大小正确.纯化了蛋白Vif、SH3和GST.GST pull-down试验说明Vif和SH3蛋白具有体外特异性结合活性.结论 成功地克隆、表达和纯化了Vif蛋白,Vif与SH3蛋白具有结合活性,为进一步研究针对Vif与SH3结合的药物筛选提供实验依据.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘朝奇	三峡大学分子生物学研究所	171	552	10.0	15.0
2	覃晓琳	三峡大学分子生物学研究所	23	62	4.0	7.0
3	刘徽婷	三峡大学分子生物学研究所	7	40	3.0	6.0
4	汪龚泽	三峡大学分子生物学研究所	8	16	2.0	4.0