新型抗HIV-1蛋白GRFT的构建、表达及活性研究

• 作者: 于芳 刘玉生 叶明 李昌 李霄 杜寿文 王婧 胡博 金宁一 韩佳丽
• 来源期刊: 高等学校化学学报
• 学科: 化学
• 关键词: HIV-1 抗病毒蛋白 GRFT 表达 生物活性
• 年，卷（期）: 2011,（1）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 95-99
• 分类号: O629.73|Q512|Q786
• 字数: 3556字
• 语种: 中文

摘要

根据已知的新型抗HIV-1蛋白Griffithsin(GRFT)基因氨基酸序列,推测其DNA编码序列,对密码子优化及修饰后进行全基因化学合成,连接到原核表达载体pET28a(+)中,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,获得目的蛋白.SDS-PAGE和Western Blot分析结果表明,目的蛋白得到良好表达并具有抗原活性.对表达条件进行了优化,在最佳表达条件下,目的蛋白的表达量可占菌体总蛋白的55.84%.利用Ni2+-NTA柱亲和层析法进行目的蛋白的复性和纯化,凝胶成像系统扫描分析表明,其纯度可达94.06%.运用Dot-ELISA法进行复性蛋白的抗原结合活性检测发现,目的蛋白可与HIV-1膜蛋白抗原特异性结合,初步证明所表达的重组蛋白具有良好的体外结合活性.基于制备的能够表达HIV-1 gp120基因的靶细胞模型,运用IFA法开展目的蛋白的细胞结合活性研究,结果发现,目的蛋白能够与靶细胞发生特异性反应,表明成功制备了具有生物活性的新型抗HIV-1蛋白GRFT,为进一步研制新型抗HIV-1基因工程药物及其靶向治疗制剂奠定了基础.