连环蛋白p120 shRNA重组慢病毒载体构建及鉴定

• 作者: 林士波 沈锋 石欣 程张军
• 来源期刊: 第二军医大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 连环蛋白p120 RNA干扰 慢病毒 胰腺肿瘤
• 年，卷（期）: 2010,（5）
• 所属期刊栏目: 技术方法
• 页码范围: 553-557
• 分类号: R735.9
• 语种: 中文
• DOI: 10.3724/SP.J.1008.2010.00553

摘要

目的 构建连环蛋白p120特异性shRNA重组慢病毒载体,感染胰腺癌PANC-1细胞,鉴定干扰效果.方法 针对p120ctn mRNA设计合成3对shRNA序列,连接人酶切线性化的慢病毒载体pGCSIL-GFP,PCR鉴定及测序正确后与构建成功的含p120ctn基因的载体pGC-FU-p120ctn-3FLAG共转染293T细胞,蛋白质印迹分析筛选有效shRNA序列,包装慢病毒,测定病毒滴度.重组慢病毒感染胰腺癌PANC-1细胞,实时定量PCR及蛋白质印迹分析鉴定干扰效果.结果 PCR及测序证实成功构建出p120ctn-shRNA-LV慢病毒载体,病毒滴度达到3×10 9TU/ml.重组慢病毒感染PANC-1细胞后,实时定量PCR提示PANC-1细胞p120ctn mRNA表达下降82.6%(P<0.05),蛋白质印迹分析提示p120ctn蛋白表达较转染前显著下降.结论 成功构建出p120ctn基因shRNA慢病毒载体,为进一步研究p120ctn在胰腺癌浸润及转移中的作用奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	石欣	东南大学附属中大医院普通外科	87	296	10.0	12.0
2	沈锋		124	1043	13.0	28.0
3	林士波	东南大学附属中大医院普通外科	7	15	2.0	3.0
4	程张军	东南大学附属中大医院普通外科	28	96	4.0	9.0