来自桔青霉的阿魏酸酯酶的分离纯化、理化性质

• 作者: 方柏山 李夏兰 范韵敏
• 来源期刊: 微生物学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 阿魏酸酯酶 纯化 性质
• 年，卷（期）: 2010,（8）
• 页码范围: 1058-1064
• 分类号: Q814
• 语种: 中文

摘要

[目的]从桔青霉的发酵液中分离纯化了胞外阿魏酸酯酶(PcFAE)并进行了酶学性质的研究,初步探讨了PcFAE对麦糟的酶解作用.[方法]利用(NH4)2SO4沉淀、DEAE-Sepharose Fast Flow离子交换层析、Phenyl Sepharose 6 Fast Flow疏水层析纯化得到电泳纯的阿魏酸酯酶.[结果]从该菌株的发酵液中获得一阿魏酸酯酶,该酶亚基分子量约为31 kDa,全酶分子量约为58 kDa.其最适pH为6.0,最适温度为45℃-65℃,在pH 5.0-6.0及25℃-55℃之间,酶保持了较好的稳定性.Mg2+、Fe2+、Mn2+、Ca2+和Na+对酶活有一定的促进作用,Zn2+对PcFAE酶活有一定的抑制作用,而Cu2+、亮抑肽素、抑肽酶有显著的抑制作用,Hg2+、苯甲基磺酰氟几乎完全抑制了酶活.EDTA对PcFAE活性无明显影响.PcFAE的kcat/Km对香豆酸甲酯、芥子酸甲酯、阿魏酸甲酯、咖啡酸甲酯的值分别为823、416、103、0,PcFAE对MpCA的催化效率最高.PcFAE作用于麦糟,当5 U PcFAE/g麦糟时,其阿魏酸的释放量为7.2%.[结论]获得了一阿魏酸酯酶,其理化性质与至今报道的阿魏酸酯酶有所不同,为阿魏酸酯酶的开发提供了重要的实验依据.