APRIL shRNA表达载体的构建与筛选

• 作者: 丁伟峰 丛辉 孙宝兰 孙长江 王峰 王惠民 王跃国 鞠少卿
• 来源期刊: 现代检验医学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 增殖诱导配体 短发夹RNA G418 真核表达载体
• 年，卷（期）: 2010,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 27-30
• 分类号: Q786
• 字数: 2977字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-7414.2010.02.010

摘要

目的 构建并筛选有效的、编码短发夹RNA(shRNA)的增殖诱导配体(APRIL)基因特异性真核表达裁体.方法 分别设计、合成4对寡核苷酸单链,经退火、连接得到APRIL-shRNA双链,定向克隆至带有H1启动子、绿色荧先蛋白(green fluorescent protein,GFP)基因和Neo基因的pGCsi-H1/Neo/GFP质粒裁体中,柏建4条含APRIL基因shRNA的pGCsi-H1/Neo/GFP-APRIL-shRNA真核表达裁体,转染高表达APRIL的结直肠癌细胞株SW480.G418筛选,荧光显微镜下现察转染效率,FQ-RT-PCR检测APRIL mRNA水平,Western印迹分析APRIL蛋白表达.结果 测序证实pGCsiH1/Neo/GFP-APRIL-shRNA(APRIL shRNA)构建成功,无碱基突变,4种不同shRNA质粒转染细胞后APRIL mRNA和蛋白表达差别有统计学显著性意义(P＜0.01).结论 成功地构建APRIL shRNA真核表达裁体,敲低效率85%以上,可用于后续的实验研究.