植烷酸氧化酶真核表达载体的构建及其细胞内定位

• 作者: 夏高晓 姜勇 孙明晶 胡水旺
• 来源期刊: 热带医学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 植烷酸氧化酶 载体构建 蛋白定位
• 年，卷（期）: 2010,（5）
• 所属期刊栏目: 硕博专栏论著
• 页码范围: 495-497,501,封2
• 分类号: Q512
• 语种: 中文

摘要

目的 构建小鼠植烷酸氧化酶(Phyh)真核表达载体,并观察其在NIH 3T3细胞中的表达定位情况.方法 提取BALB/c小鼠肝脏组织的总RNA,通过RT-PCR扩增得到Phyh编码序列,将其克隆到真核表达载体pcDNA3上;对阳性克隆进行PCR、酶切和测序鉴定,利用脂质体转染方法转染NIH 3T3细胞;使用细胞免疫化学技术对重组质粒pcDNA3/HA.Phyh在NIH 3T3细胞中的表达及蛋白定位进行分析.结果 PCR、双酶切和测序鉴定表明,pcDNA3/HA-Phyh真核表达质粒构建正确;转染实验发现,该质粒能够在NIH 3T3细胞中表达,表达产物主要定位在细胞质中.结论 成功构建了带HA标签的小鼠Phyh真核表达载体,该载体能够在哺乳动物细胞NIH 3T3中表达,为进一步研究Phyh的细胞内生物学功能提供了一个重要的工具.