Fcγ-Der f2载体构建及融合蛋白表达

• 作者: 周娟 孔存权 崔玉宝 彭霞 李莉 王娟 蔺丽慧
• 来源期刊: 国际检验医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 粉尘螨 重组融合蛋白质类 基因表达
• 年，卷（期）: 2010,（1）
• 所属期刊栏目: 上海检验专栏
• 页码范围: 1-3
• 页数: 3页
• 分类号: R446.61|R384.4
• 字数: 3916字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-4130.2010.01.001

摘要

目的 构建人IgG Fcγ1片段Fcγ与粉尘螨Ⅱ类抗原Der f2嵌合基因真核表达载体pDisplay-Fcγ-Der f2,并转染入HEK293T细胞系瞬时表达,获得Fcγ-Der f2融合蛋白.方法 以pMD19-T-Der f2载体为模板,设计引物并加入linker序列,经PCR扩增得到linker-Der f2 DNA片段.经限制性内切酶酶切后,先后将人Fcγ及linker-Der f2基因片段接入pDisplay真核表达载体.用Attractene转染试剂将其转染至HEK293T细胞使之表达融合蛋白.免疫荧光检测转染后72 h的HEK293T细胞并裂解细胞进行Western Blot检测.结果 pDisplay-Fcγ-Der f2质粒经双酶切鉴定及DNA测序鉴定证实序列完全正确,真核表达载体构建成功.免疫荧光鉴定转染细胞可见明显红色荧光.Western Blot检测证明融合蛋白相对分子质最为40×10~3,与理论预期值相符合,并证明了Fcγ与Der f2双功能特性.结论 构建的融合蛋白Fcγ-Der f2符合目的要求.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李莉	上海交通大学附属第一人民医院检验科	130	700	13.0	20.0
2	王娟	上海交通大学附属第一人民医院检验科	57	401	10.0	18.0
3	周娟	上海交通大学附属第一人民医院检验科	25	194	7.0	13.0
4	蔺丽慧	上海交通大学附属第一人民医院检验科	9	33	3.0	5.0
5	彭霞	上海交通大学附属第一人民医院检验科	16	55	4.0	6.0
6	孔存权	上海交通大学附属第一人民医院检验科	4	7	2.0	2.0
7	崔玉宝		3	6	2.0	2.0