hFOXP3-△E251的克隆及在大肠杆菌中的表达

• 作者: 宗扬勇 蔺昕 许逊 邵启祥
• 来源期刊: 现代生物医学进展
• 学科: 医学
• 关键词: PTD-hFOXP3-△ E251 基因克隆 表达载体 大肠杆菌
• 年，卷（期）: 2010,（8）
• 页码范围: 1401-1404
• 分类号: Q75|Q78|R446
• 语种: 中文

摘要

目的:构建和表达带HIV-TAT穿膜序列(Protein transduction domain,PTD)的人FOXP3突变体PTD-hFoxP3-△E251,为研究人FOXP3的功能奠定基础.方法:采用逆转录-聚合酶链式反应(reverse transcTiption-polymerase chain reaction,RT-PCR)方法,从人外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)总RNA中扩增得到人FOXP3(hFOXP3)的cDNA,然后再利用重叠PCR技术扩增获得hFOxP3-△E251基因实变体片段.将该重组突变体插入表达载体pET28a-PTD中,构建表达质粒pET28a-PTD-hFOXP3-△E251,然后转化感受态细菌E.coli Rosetta(DE3),最终采用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside,IPTG)诱导表达.结果:SDS-PAGE电泳分析发现,经0.5mM IPTG诱导8h后,可高效表达重组的融合蛋白,表达产物以包涵体形式存在.结论:成功制备了带穿膜序列的人FOXP3△E251突变体融合蛋白.为更好地研究人FOXP3的功能与特性奠定了实验基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	邵启祥	江苏大学基础医学与医学技术学院免疫学与免疫学检验系	78	336	9.0	14.0
2	宗扬勇	江苏大学基础医学与医学技术学院免疫学与免疫学检验系	3	8	2.0	2.0
3	蔺昕	南京医科大学附属南京第一医院检验科	8	29	4.0	5.0
5	许逊	江苏大学基础医学与医学技术学院免疫学与免疫学检验系	3	2	1.0	1.0