β-防御素2真核表达载体的构建及其在肝癌细胞Hepa1-6中的稳定表达

• 作者: 朱家勇 梅寒芳 金小宝
• 来源期刊: 中国老年学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 防御素 天然免疫 肝癌 Overlap-PCR
• 年，卷（期）: 2010,（9）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 1213-1215
• 分类号: R737.31
• 字数: 3537字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-9202.2010.09.021

摘要

目的 克隆抗菌肽β防御素2(mBD2)基因,构建真核分泌性表达载体,使其在Hepa1-6细胞中稳定表达.方法 Trizol试剂提取C57BL/6鼠肾总RNA,RT-PCR扩增mBD2成熟肽基因,Overlap-PCR在成熟肽基因上游加上鼠IgК信号肽基因,克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+),PCR、酶切和测序鉴定正确后,脂质体法转染Hepa1-6细胞,G418筛选,RT-PCR和Western印迹法从mRNA和蛋白角度鉴定mBD2分子的表达.结果 成功克隆含有信号肽的IgК-mBD2序列,并且构建pcDNA3.1(+)/IgК-mBD2真核分泌性表达载体,实现了mBD2分子在Hepa1-6细胞中稳定表达,RT-PCR从细胞总RNA中扩增得到202 bp的IgК-mBD2基因,Western印迹法鉴定细胞培养上清中有mBD2蛋白分子表达.结论 成功构建了pcDNA3.1(+)/IgК-mBD2真核分泌性表达载体,转染得到稳定表达mBD2的Hepa1-6细胞株,为进一步研究mBD2的生物学特性及抗肝癌机制奠定细胞学基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	朱家勇	广东药学院广东省生物活性药物研究重点实验室	121	797	13.0	22.0
2	金小宝	广东药学院广东省生物活性药物研究重点实验室	100	490	12.0	15.0
3	梅寒芳	广东药学院广东省生物活性药物研究重点实验室	21	91	5.0	8.0