RV-G/LTB双基因融合真核表达质粒的构建及其在Vero细胞中的表达

• 作者: 于录 刘娟 刘学 刘明远 孙树民 李慧萍 李扬 王学林 赵丽晶 郭恒
• 来源期刊: 中国生物制品学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 狂犬病病毒 糖蛋白类 大肠杆菌不耐热肠毒素B 融合基因 Vero细胞
• 年，卷（期）: 2011,（3）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 255-258
• 分类号: Q78
• 语种: 中文

摘要

目的 构建RV-G/LTB双基因融合真核表达质粒,并在Vero细胞中表达.方法 应用重叠延伸PCR方法,采用一定的linker序列(Gly4Ser)2将已克隆的狂犬病病毒糖蛋白(Rabies virus glycoprotein,RV-G)基因片段和大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位(E.coli heat-labile enterotoxin subunit B,LTB)基因片段进行融合,扩增融合基因Clinker-LTB,并插入真核表达质粒pVAX1中,构建重组真核表达质粒pVAX1-G-linker-LTB,转染Vero细胞,间接免疫荧光试验和Western blot法检测融合蛋白的表达.结果 重组真核表达质粒pVAXI-G-linker-LTB经双酶切及测序鉴定证明构建正确,转染Vero细胞后,可检测到融合蛋白的表达.结论 已成功构建了RV-G/LTB双基因融合真核表达质粒,并在Vero细胞中表达了融合蛋白.