PRL-3基因RNA干扰慢病毒载体的构建及稳定感染HepG2单克隆细胞株的建立

• 作者: 苏树英 陈规划 黄德好
• 来源期刊: 中国临床药理学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: RNA干扰 慢病毒 PRL -3基因 肝细胞癌
• 年，卷（期）: 2011,（11）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 862-866
• 分类号: R735.7|R965.2
• 字数: 3308字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1001-6821.2011.11.013

摘要

目的 构建PRL -3基因RNA干扰慢病毒载体并建立被稳定感染的HepG2单克隆细胞株.方法 设计PRL -3基因特异性RNAi靶序列,合成靶序列的DNA oligo,退火形成双链DNA,与含绿色荧光蛋白(GFP)编码基因的pGCL- GFP线性化载体连接,产生重组慢病毒质粒LV - PRL3 - siRNA,转化感受态细胞,PCR筛选阳性克隆,并测序鉴定.用Lipofectamine 2000将LV - PRL3 -siRNA、pHelper 1.0和pHelper 2.0这3种质粒共转染293T细胞,包装产生慢病毒,经孔稀释法,测定病毒滴度.重组慢病毒感染肝癌HepG2细胞,进行RealTime - PCR和Western - Blot验证PRL -3基因的沉默效果,筛选出最佳干扰序列组及阴性对照组的单克隆细胞株.结果 成功构建PRL -3基因RNA干扰慢病毒载体并获得相应的慢病毒,浓缩病毒悬液的滴度为6E+8 Tu·mL-.重组慢病毒对HepG2细胞PRL -3基因表达有明显沉默作用,其中第一干扰序列效果最明显.筛选出最佳干扰序列组及阴性对照组的单克隆肝癌细胞株.结论 成功构建人PRL -3基因特异性的慢病毒干扰载体,并筛选出最佳干扰序列组及阴性对照组的单克隆肝癌细胞株.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	苏树英	佛山市第一人民医院胆道外科	44	154	7.0	10.0
2	陈规划	中山大学附属第三医院肝移植科	219	1270	16.0	25.0
3	黄德好	佛山市第一人民医院胆道外科	3	4	1.0	2.0