小分子蛋白慢病毒表达系统的构建

• 作者: 于红静 尹巧云 李力 王琪
• 来源期刊: 中国癌症防治杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 慢病毒 小分子蛋白 卵巢癌
• 年，卷（期）: 2011,（4）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 271-276
• 分类号: R737.31
• 字数: 4212字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-5671.2011.04.01

摘要

目的 构建趋化因子蛋白慢病毒表达系统,建立稳定表达GFP的卵巢癌细胞系,为研究趋化因子蛋白的功能及作用机制打下基础.方法 趋化因子CCL18、IL-8、CXCL1基因克隆质粒经PCR扩增、酶切,与慢病毒载体PWPI连接,构建的重组慢病毒质粒按比例与包膜质粒PCMV-dR 8.74及包装质粒PMD2.G混合,LipofectinTM2000共转染293T细胞系包装病毒颗粒,病毒液感染卵巢癌SKOV3细胞后,采用流式细胞仪分选出GFP表达的细胞作为转染成功的细胞.实时荧光定量PCR验证转染后目的基因的表达,Western blot验证目的蛋白的表达.结果 重组慢病毒基因能高效地转导入靶细胞,转导效率达95％以上,并稳定表达；实时荧光定量PCR检测结果显示:细胞和组织中转染目的基因组与对照组比较,均见目的基因的表达显著增高(P＜0.05)；Western blot验证转染目的基因组小分子蛋白成功表达.结论 本实验成功构建了小分子蛋白慢病毒表达系统,为进一步研究小分子蛋白在人体的功能及作用机制建立了实验基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李力	广西医科大学附属肿瘤医院妇瘤科	377	1810	20.0	26.0
2	王琪	广西医科大学附属肿瘤医院实验研究部	87	263	8.0	11.0
3	尹巧云	南宁广西医科大学研究生学院	1	13	1.0	1.0
4	于红静	南宁广西医科大学研究生学院	2	23	2.0	2.0