人Gal-9基因的克隆及在CHO细胞中的表达

• 作者: 易路阳 许楚娟 邱文洪 郭凯文
• 来源期刊: 中国免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: Gal-9 构建 表达 真核表达载体
• 年，卷（期）: 2011,（9）
• 所属期刊栏目: 分子与细胞免疫学
• 页码范围: 775-778
• 分类号: R392
• 字数: 4212字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-484X.2011.09.002

摘要

目的:构建β-半乳糖苷结合凝集素-9(Gal-9)的真核表达载体,在CHO细胞中表达,并检测其表达.方法:通过DNA重组技术和PCR方法从人外周血单个核细胞克隆Gal-9基因,插入真核表达载体pcDNA3.1(+)中,通过PCR、酶切及测序鉴定重组载体的正确性;采用脂质体转染技术将重组质粒pGal-9瞬时转染CHO细胞,通过Western blot和RT-PCR方法检测Gal-9的表达,MTT法检测Gal-9对同种异体淋巴细胞增殖的影响.结果:DNA测序和酶切鉴定证明Gal-9基因正确克隆至pcDNA3.1(+)的多克隆位点;以重组质粒pGal-9瞬时转染CHO细胞,通过Western blot和RT-PCR方法,在分子和蛋白水平证实Gal-9的表达,MTT法检测显示,Gal-9明显抑制同种异体淋巴细胞增殖反应,平均抑制率达85.43%.结论:成功构建pGal-9的真核表达载体,证实其在CHO细胞中可以成功表达,并抑制同种异体淋巴细胞增殖反应.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	郭凯文	武汉科技大学医学院免疫学教研室	32	190	7.0	13.0
2	邱文洪	江汉大学医学院免疫学教研室	31	133	7.0	11.0
3	许楚娟	江汉大学医学院免疫学教研室	3	23	1.0	3.0
4	易路阳	江汉大学医学院免疫学教研室	3	1	1.0	1.0