Pax6variant新基因的原核表达蛋白纯化和多克隆抗体制备

• 作者: 宋德潇 李杰 高岚
• 来源期刊: 济宁医学院学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 花背蟾蜍 Pax6 variant 原核表达 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2011,（6）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 381-384,402
• 分类号: Q954.4
• 字数: 3185字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-9760.2011.06.001

摘要

目的 构建花背蟾蜍(Bufo raddei Strauch)转录因子Pax6 variant的原核表达载体,纯化融合蛋白His-Pax6 variant并以其为抗原免疫家兔,制备花背蟾蜍转录因子Pax6 variant多克隆抗体.方法 RT-PCR扩增得到花背蟾蜍胚胎组织的Pax6 variant基因,并将此片段与原核表达载体pET-28a-c连接,构建重组表达质粒pET-Pax6 variant并转化大肠杆菌Rosetta(DE3)菌株,诱导融合蛋白His-Pax6 variant表达;所获得的可溶性蛋白经亲和层析纯化、SDS-PAGE电泳鉴定后,免疫家兔制备抗血清,分别采用ELISA、Western blot检测抗体效价和特异性.结果 从花背蟾蜍胚胎组织中克隆了Pax6 variant基因,并成功构建了其原核表达质粒；SDS-PAGE结果证实获得Mr为43 300的His-Pax6融合蛋白且为可溶性蛋白;经过His亲和层析有效纯化；以该融合蛋白免疫家兔制备得到的抗血清经Western blot检测证实能与目的蛋白发生特异性结合,ELISA检测为阳性.结论 获得了花背蟾蜍转录因子Pax6 variant蛋白及特异性多克隆抗体,对进一步研究花背蟾蜍Pax6 variant在发育过程中功能奠定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	高岚	兰州大学生命科学学院	30	417	9.0	20.0
2	李杰	济宁医学院精神卫生学院	5	4	1.0	1.0
3	宋德潇		5	4	1.0	1.0