重叠延伸PCR法构建VPS4B基因定点突变真核表达载体

• 作者: 夏剑波 李磊 杨东亮 王维鹏 郝友华
• 来源期刊: 临床检验杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 细胞液泡蛋白质分选因子4B 重叠延伸PCR 定点突变 真核表达载体
• 年，卷（期）: 2011,（1）
• 页码范围: 57-59
• 页数: 3页
• 分类号: Q955
• 语种: 中文

摘要

目的 构建含液泡蛋白质分选因子4B(VPS4B)基因定点突变的真核表达载体.方法 用RT-PCR法从HuH-7细胞中扩增VPS4B基因,并克隆到真核载体pXF3H上.采用重叠延伸PCR定点突变技术,构建K180Q和E235Q两种突变质粒,经DNA测序确证定点突变的结果,再将VPS4B及两种突变载体转染HepG2细胞,western blot检测融合蛋白表达.结果 克隆了VPS4基因,构建了真核载体pXF3H-VPS4B,经重叠延伸PCR得到突变体.DNA测序结果显示,编码180位氨基酸的538～540位碱基由AAG突变为CAG;编码235位氨基酸的703～705位碱基由GAA突变为CAA,其他碱基均无突变.VPS4B及两种突变载体转染HepG2细胞可栓出HA-VPS4B融合蛋白表达.结论 成功构建了VPS4以及K180Q和E235Q两种突变的真核表达载体.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	郝友华		26	102	6.0	9.0
2	杨东亮		127	582	14.0	17.0
3	李磊		44	210	8.0	13.0
4	夏剑波		5	27	2.0	5.0
5	王维鹏		3	0	0.0	0.0