小鼠神经细胞cDNA T7噬菌体表面展示文库的构建

• 作者: 宋德光 张磊升 贺文琦 赵魁 陆慧君 高丰 高巍
• 来源期刊: 中国生物制品学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 小鼠 神经元 细菌噬菌体T7 基因文库
• 年，卷（期）: 2011,（9）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 1013-1015,1021
• 分类号: Q2-33|Q78
• 语种: 中文

摘要

目的 构建小鼠神经细胞cDNA T7噬菌体表面展示文库.方法 用Trizol试剂提取原代小鼠神经细胞总RNA,分离、纯化mRNA,经反转录合成其双链cDNA.在双链cDNA末端加上定向EcoR Ⅰ/HindⅢ接头,用内切酶EcoR Ⅰ和HindⅢ消化接头,以形成两端分别带有EcoR Ⅰ和HindⅢ黏性末端的双链cDNA.经Mini Column进行纯化,收集大小在300 bp以上的双链cDNA片段,将其连接于含有EcoR Ⅰ和HindⅢ末端的T7Select 10-3b载体上,体外包装后经BLT5403菌株增殖,进行文库扩增.结果 所构建的文库库容量为含有3.04× 107个重组子,原始滴度为2.8×107 pfu/ml,重组率为92%,扩增后文库滴度为3.5×1010 pfu/ml.对随机挑取的100个噬菌斑进行PCR鉴定,88%的插入片段大于300 bp.结论 成功构建了小鼠神经细胞cDNA T7噬菌体表面展示文库.