番茄Metacaspase基因(LeM)的克隆及其在大肠杆菌Rosetta中的高效表达

• 作者: 刘金娜 张雅丽 曲桂芹 罗云波 谢寒丁 车英慧 马秋敏
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 学科: 农学
• 关键词: 番茄 Metacaspase 基因克隆 原核表达
• 年，卷（期）: 2011,（2）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 258-262
• 分类号: S641.2
• 字数: 3522字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2011.02.009

摘要

为获得可溶性的番茄Metacaspase蛋白,后续研究Metacaspase蛋白的酶学特性以及功能,利用RT-PCR方法克隆了番茄(Lycopersicon esculentum)中Metacaspase(LeM)全长cDNA,并成功地构建了LeM基因的原核表达载体重组质粒pET28a-LeM,转入大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)PlysS和Rosetta中进行诱导表达,并对诱导表达条件进行了优化.SDS-PAGE结果显示,在37℃条件下,1 mmol/L IPTG诱导表达量最高,在BL21(DE3)PlysS菌株中重组蛋白主要以包涵体形式存在,而相同条件下在Rosetta菌株中多为可溶性表达.同时酶活测定显示,Rosetta上清中LeM的活性为33 RFU/min,显著高于BL21(DE3)PlysS 7RFU/min.本实验表明,不同菌株对Metacaspase的可溶性表达有很大影响.