cry基因保守序列克隆及其在大肠杆菌Rosetta(DE3)中的表达

• 作者: 曾万勇 李金华 罗翠平 谢烨明
• 来源期刊: 安徽农业科学
• 学科: 农学
• 关键词: Bt基因 保守序列 克隆 原核表达
• 年，卷（期）: 2012,（2）
• 所属期刊栏目: 生物技术
• 页码范围: 648-651
• 分类号: S481+.9
• 字数: 3432字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.0517-6611.2012.02.008

摘要

[目的]对cry基因保守序列进行克隆,并使其在大肠杆菌Rosetta( DE3)中进行表达.[方法]根据NCBI数据库信息设计引物序列,采用PCR技术从抗虫棉基因组DNA中扩增出抗虫基因cry的保守序列,构建重组载体并转化到大肠杆菌Rosetta( DE3)菌株中,利用pGEX原核表达系统诱导蛋白表达.同时,分析了不同IPTG浓度及不同诱导时间对蛋白表达量的影响.[结果]扩增出抗虫基因cry的两段保守序列,长度分别为304和853 bp；SDS-PAGE检测结果显示,经IPTG诱导后重组质粒pGEX-4t-1-304和pGEX-4t-1-853成功地表达了大量GST融合蛋白,分子量分别为39和62.4 kDa,与预期结果一致；确定了IPTG最佳诱导浓度为0.15 mmol/L,最佳诱导时间为7h.[结论]为今后检测转Bt基因农作物奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	曾万勇		9	38	4.0	6.0
2	李金华		10	54	4.0	7.0
3	罗翠平		5	5	1.0	1.0
4	谢烨明		6	13	2.0	3.0