黑曲霉MAN1基因在大肠杆菌中的表达及酶学性质分析

• 作者: 张旭 徐欣 曹雨婷 李杰 李璐
• 来源期刊: 东北农业大学学报
• 学科: 生物学
• 关键词: β-甘露聚糖酶 MAN1 大肠杆菌 克隆
• 年，卷（期）: 2011,（12）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 91-96
• 分类号: Q786
• 字数: 2799字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-9369.2011.12.018

摘要

为了通过基因工程的方法在大肠杆菌中生产β-甘露聚糖酶.以β-甘露聚糖酶生产菌黑曲霉为材料,通过RT-PCR扩增获得β-甘露聚糖酶基因MAN1的cDNA片段,将该片段克隆连至pMD18-T并测序.Blast比对结果表明,该序列与GenBank中编号XM001400053的序列相似性为100％,将pMD18-MAN1与PET-32b进行双酶切后连接,构建原核表达载体pET-MA N1.酶切鉴定正确后,将该载体导入大肠杆菌BL21.重组菌株经IPTG诱导表达,将表达产物进行SDS-PAGE,并用DNS法的测定不同温度、不同pH下该融合蛋白的甘露聚糖酶活性.结果表明,经IPTG诱导,转化得到约62 ku的融合蛋白条带,IPTG最佳诱导表达时间是6h,融合蛋白质以可溶组分形式存在.经DNS测定,重组甘露聚糖酶的最适温度为55℃,最适pH为5.5,在此条件下,甘露聚糖酶活力为48 IU·mL-1.研究结果以期为甘露聚糖酶的工业化生产探索新的途径.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李杰	东北农业大学生命科学学院	193	1723	20.0	30.0
2	张旭	东北农业大学生命科学学院	47	287	9.0	15.0
3	李璐	东北农业大学生命科学学院	31	136	6.0	11.0
4	曹雨婷	东北农业大学生命科学学院	1	1	1.0	1.0
5	徐欣	东北农业大学生命科学学院	3	3	1.0	1.0