原核表达载体GST-RUNX3的构建及其在大肠杆菌中的表达

• 作者: 姜佩家 王孝会 王桂玲 都田赵 陈薇
• 来源期刊: 解剖科学进展
• 学科: 医学
• 关键词: 质粒 原核表达 融合蛋白
• 年，卷（期）: 2011,（3）
• 所属期刊栏目: 原著
• 页码范围: 284-286
• 分类号: R378.2+1
• 字数: 1844字
• 语种: 中文

摘要

目的 构建GST/RUNX3融合蛋白表达载体,并在大肠埃希菌(E.coil)中诱导表达.方法 以质粒pcDNA3.1-RUNX3为模板,通过Kpn1和Xho1酶切位点将RUNX3定向插入pGEX-4T-2中,构建原核表达质粒pGEX-4T-2-RUNX3,并转化E.coil DH5α,筛选阳性重组子,限制性内切酶酶切鉴定和DNA序列测定正确后,转入E.coli BL21中,异丙基硫代β-D半乳糖苷诱导表达,鉴定.结果 双酶切获得1300bp片段,证明RUNX3片段被成功导入pGEX-4T-2,并在测序后与GenBank进行同源性比对,比对进一步证实原核表达质粒pGEX-4T-2-RUNX3构建成功,并用IPTG诱导,SDS-PAGE方法证实了GST/RUNX3融合蛋白在大肠杆菌中的表达.结论 成功构建了RUNX3原核表达载体,并证实了融合蛋白在大肠埃希菌中的表达,为进一步纯化RUNX3蛋白和研究RUNX3的生物学功能奠定了基础.