pHSP70P-EGFP真核表达载体的构建及其在人Chang's肝细胞中的表达

• 作者: 杨学文 陈亚军 高峰
• 来源期刊: 临床检验杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 热激蛋白 启动子 人Chang's肝细胞 基因重组
• 年，卷（期）: 2011,（6）
• 所属期刊栏目: 基础实验诊断研究
• 页码范围: 444-447
• 页数: 4页
• 分类号: Q78
• 语种: 中文

摘要

目的 构建HSP70启动子与绿色荧光蛋白重组真核表达载体,并在人Chang's肝细胞表达,建立一种新的体外药物肝毒性早期预测细胞模型.方法 提取人Chang's肝细胞基因组DNA,钓取HSP70启动子基因,构建重组载体,经脂质体转染人Chang's肝细胞,用G418筛选稳定转染细胞,用荧光显微镜观察绿色荧光表达情况,用实时荧光定量PCR检测EGFP基因表达量的变化.结果 成功钓取HSP70启动子基因并导入真核表达载体pEGFP-N1;G418以300 ng/mL的终浓度筛选出稳定转染的单克隆细胞;荧光显微镜观察到肝毒性药物酮康唑刺激人Chang's 肝细胞后,可诱导HSP70启动子调控增强型绿色荧光蛋白发出绿色荧光,药物刺激组EGFP mRNA相对表达量与正常对照组比较有统计学意义(t=-14.21,P<0.05).结论 成功构建HSP70启动子与绿色荧光蛋白共表达真核表达载体,获得稳定转染单克隆细胞,并证实HSP70在肝毒性药物刺激下的应激表达,为建立新的体外药物肝毒性早期预测细胞模型进行高通量筛选新药奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	高峰		28	81	6.0	8.0
2	杨学文		31	182	8.0	12.0
3	陈亚军		10	22	3.0	4.0