MNDA及MNDA-HIN200片段在大肠杆菌中克隆、表达及纯化

• 作者: 刘勇 张飞云 李智 郑晓峰
• 来源期刊: 生物技术通报
• 学科: 生物学
• 关键词: MNDA HIN-200 基因克隆 原核表达 纯化
• 年，卷（期）: 2011,（8）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 181-186
• 分类号: Q78
• 字数: 5036字
• 语种: 中文

摘要

MNDA蛋白是与免疫反应相关的HIN-200家族成员之一,可作为模式识别受体来识别外源性双链DNA,它在人类免疫性疾病中发挥重要作用.通过PCR扩增获得的MNDA全长cDNA和MNDA-H1N200基因片段克隆到原核表达载体pET-28a中,使其N端带有一个His标签,将重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)表达菌株,经IPTG诱导后,分别经过亲和层析和分子筛层析对MNDA和MNDA-HIN200进行纯化.DNA测序表明,构建的重组质粒正确,筛选了蛋白最适表达菌株BI21(DE3)；由于PYD(88aa)结构域之间的相互作用影响MNDA的表达量度聚集状态,因此设计了PYD缺失的只含有HIN-200结构域的突变体MNDA-HIN200,最终获得了大量的、均一性好、高纯度的MNDA-HIN200蛋白,为MNDA的蛋白的晶体筛选和结构解析奠定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张飞云	首都师范大学生命科学学院	23	111	6.0	9.0
2	李智	首都师范大学生命科学学院	26	243	9.0	15.0
4	刘勇	北京大学生命科学学院	23	127	6.0	11.0
5	郑晓峰	北京大学生命科学学院	2	1	1.0	1.0