pSG5-Oct4真核表达质粒的构建及瞬时表达

• 作者: 李奕 畅继武 郭嘉宁 雷建园
• 来源期刊: 中国现代医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: Oct4骨髓间充质干细胞 真核表达
• 年，卷（期）: 2011,（13）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 1421-1425,1429
• 页数: 6页
• 分类号: R.34
• 字数: 3988字
• 语种: 中文

摘要

目的 克隆人胚胎干细胞的关键基因Oct4,构建真核表达质粒pSG5-Oct4,并检验其在胎儿胰岛间质细胞中的瞬时表达.方法 通过RT-PCR从胎儿骨髓间充质干细胞克隆出基因Oct4的全长序列,插入真核表达栽体pSG5中,经筛选阳性克隆、EcoR Ⅰ和BamH Ⅰ双酶切鉴定及测序分析后,用Fugene HD转染试剂转染胎儿胰岛间质细胞,采用RT-PCR和免疫细胞化学染色检测重组质粒pSG5-Oct4在胎儿胰岛间质细胞中的表达情况.结果 经RT-PCR扩增得到大小约1.1 kb的条带,测序与GenBank中Oct4(NM_002701.4)基因序列的同源性达97%;EcoR Ⅰ和BamH Ⅰ双酶切重组质粒,琼脂糖凝胶电泳分析插入基因的大小和方向均正确;经RT-PCR和免疫细胞化学染色检测,pSG5-Oct4转染胎儿胰腺间质细胞后能表达Oct4蛋白.结论 本实验成功构建了真核表达质粒pSG5-Oct4,且目的 基因可在胎儿胰岛间质细胞瞬时表达,为进一步研究Oct4在真核细胞中的调节作用及后续实验奠定了基础.