耐酸耐温α-淀粉酶基因在大肠杆菌中的功能表达

• 作者: 何冰芳 廖思明 熊伍平 王成华 王青艳 黄日波
• 来源期刊: 南京工业大学学报（自然科学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: 淀粉酶 密码子偏好 耐酸 耐温 表达
• 年，卷（期）: 2012,（3）
• 页码范围: 20-26
• 分类号: Q556.2
• 字数: 3340字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-7627.2012.03.004

摘要

兼顾大肠杆菌与枯草芽孢杆菌密码子偏好性,优化获得了1个耐酸耐温淀粉酶的基因amyCN1,并将其在大肠杆菌中实现了功能表达.纯化后的重组α-淀粉酶(AM Y1)表征结果表明:在最适pH5.5和最适温度75℃条件下表观米氏常数(Km)值和催化效率(kcat/Km)值分别为20.93 g/L和98.20 L/(g·s)；低浓度的Co2+(1 mmol/L)可以提高30％的淀粉酶活力,Mn2+抑制了大部分活力,包括ca2+在内的其他金属离子影响不显著；高浓度的EDTA(≥50 mmol/L)抑制其活力；生物信息学分析表明,AMY1具有α-淀粉酶家族典型的3-结构域分布,具有1个Ca2+结合位点和5个Zn2+结合位点,活性中心催化氨基酸残基D198和E222位于(β/α)8桶中β折叠片C端一侧.AMY1优良的低pH耐受性和耐温性,有助于木薯淀粉生产燃料乙醇工业液化与糖化同步发酵工艺的实现.