SUA41蛋白表达和纯化及其多克隆抗体制备

• 作者: 傅永福 韩玉珍 黄国文
• 来源期刊: 生物技术通报
• 学科: 生物学
• 关键词: SUA41 融合蛋白 蛋白纯化 兔抗血清
• 年，卷（期）: 2012,（3）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 153-158,165
• 分类号: Q943.2
• 字数: 6022字
• 语种: 中文

摘要

旨在制备特异性SUA41多克隆抗体,为深入研究其在植物生长发育中的功能提供有力的分子生物学和生物化学的工具.PCR扩增拟南芥SUA41基因中编码280个氨基酸(401-680位氨基酸)的特异片段,经过GATEWAY的DNA重组技术构建了原核表达载体pDEST17-SUA41,用热休克法转化到E.coli BL21(DE3)star感受态细胞,以异丙基β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达出6×His-SUA41融合蛋白,用8 mol/L尿素缓冲液溶解包涵体并且经过水运级去除尿素获得提纯的融合蛋白,并利用Western blotting鉴定确认.融合蛋白经Ni金属螯合柱亲和层析得以纯化,用SDS-PAGE进一步纯化.纯化的融合蛋白经过SDS-PAGE后切胶回收,免疫小白兔,制备多抗血清,然后用Western blotting进行检测,鉴定血清特异性和效价.结果显示,融合蛋白6×His-SUA41免疫兔,产生特异性的SUA41兔抗血清,可以检测到细菌和拟南芥组织中SUA41蛋白.用水提纯变性剂尿素溶解的包涵体蛋白具有可行性.制备的特异性SUA41兔抗血清效价高,能够有效地识别大肠杆菌表达的和拟南芥的SUA41蛋白.在有合适的对照情况下,该兔抗血清可以用于分析植物中SUA41蛋白的功能.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	黄国文	湖南科技学院生命科学和化学工程学院	33	59	4.0	6.0
2	韩玉珍	中国农业大学生物学院	14	226	6.0	14.0