人类成肌发育候选基因ASB12 RNAi稳定细胞系的构建与鉴定

• 作者: 吴秀山 周军媚 宋文 廖四芳 文斗斗 王跃群 胡维新
• 来源期刊: 激光生物学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 成肌发育 ASB12 pSUPER RNAi
• 年，卷（期）: 2012,（4）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 335-339
• 分类号: Q28
• 字数: 2890字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1007-7146.2012.04.009

摘要

目的:利用siRNA表达载体构建抑制人类成肌发育候选基因ASB12表达的pSUPER RNAi载体(pSU-PER-ASB12),筛选构建C2C12-pSUPER-ASB12稳定表达细胞系.方法:化学合成一对编码短发夹RNA序列的、靶向成肌发育候选基因ASB12的寡核苷酸链60个碱基,退火,克隆到经BglⅡ、Xho Ⅰ双酶切的pSUPER质粒上,构建重组RNAi质粒(pSUPER-ASB12).通过酶切鉴定及测序分析检测构建效果.将正确构建的质粒转染小鼠骨骼肌细胞C2C12,通过G418筛选,免疫荧光检测,RT-PCR分析,建立稳定表达pSUPER-ASB12的细胞系C2C12-pSUPER-ASB12.结果:pSUPER-ASB12载体经酶切鉴定及测序分析,结果表明60个碱基成功插入到预计位点,并且序列完全一致.C2C 12-pSUPER-ASB 12稳定表达细胞系可表达绿色荧光蛋白,RT-PCR检测结果显示C2C12-pSUPER-ASB12细胞中ASB12表达量明显降低.结论:靶向ASB12的pSUPER RNAi载体和C2C12-pSUPER-ASB12稳定表达细胞系构建成功,为进一步从分子水平探讨ASB12在成肌发育中的功能奠定了基础.