新型甘露聚糖酶基因的克隆及在毕赤酵母中的表达

• 作者: 武玉永 谭秀华 马立新
• 来源期刊: 药物生物技术
• 学科: 生物学
• 关键词: β-甘露聚糖酶 毕赤酵母 克隆 分泌表达 酶学性质
• 年，卷（期）: 2012,（1）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 22-26
• 页数: 5页
• 分类号: Q786
• 语种: 中文

摘要

构建土壤基因组文库,通过功能筛选得到一水解底物魔芋粉的阳性克隆,测序后,序列分析表明:该基因全长为1 530 bp,包含一个糖基水解家族26结构域,编码510个氨基酸,相对分子质量为56 438.此基因推导的氨基酸序列与Cellulomonas fimi的Man26A和Cellvibrio japonicus的mannanase A氨基酸序列同源性分别为64.3％、38％.将此基因的成熟肽的编码序列克隆到表达载体pHBM905上,得到重组质粒pHBM730,将pHBM730经SalI酶切线性化后转化3株毕赤酵母GS115、KM71、SMD1168,该甘露聚糖酶基因在这3种毕赤酵母中均实现分泌表达.将此3种重组毕赤酵母GS115 (pHBM730)、KM71( pHBM730)、SMD1168( pHBM730)诱导产酶,对这3种重组酶进行相关的酶学性质研究.分析表明,在KM71中表达量最高,其最适反应pH值均约为6.6,最适反应温度均约为45℃.在最适反应条件下测得其酶活力为19.64 U.此结果为瓜尔豆胶降解产物的工业化应用提供了参考.