一种新型木聚糖酶基因在毕赤酵母中的表达

• 作者: 冯湘沅 刘志远 彭源德 成莉凤 李琦 杨琦 段盛文 郑科
• 来源期刊: 华北农学报
• 学科: 农学
• 关键词: 木聚糖酶基因 毕赤酵母 真核表达 WesternBlot
• 年，卷（期）: 2018,（4）
• 页码范围: 126-130
• 页数: 5页
• 分类号: S330|Q78
• 字数: 4352字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7668/hbnxb.2018.04.018

摘要

为了获得新型木聚糖酶的高效分泌表达,在工程酶项目组前期原核表达了木聚糖酶基因xynA的基础上,将xynA基因(GenBank登录号:U57819)编码耐热性木聚糖酶成熟蛋白的部分序列克隆到pPICZαA表达载体上,转化毕赤酵母X33,成功构建真核表达体系,再分批加入0.5％(V/V)甲醇诱导毕赤酵母工程菌株产胞外木聚糖酶.结合木聚糖酶活力检测、SDS-PAGE电泳和Western Blot分析胞外木聚糖酶表达情况.结果表明,该XynA含有典型的糖苷水解酶11类催化结构域(GH11),成熟蛋白的预测分子量为38.6 ku,等电点为6.86;7个毕赤酵母基因工程菌株X33/pPICZαA-xynA分泌的木聚糖酶活力均≥300 U/mL,最高达487.2 U/mL;胞外木聚糖酶在SDS-PAGE和Western Blot检测的特征谱带分子量约为45 ku,均比预期分子量(38.6 ku)略大.一种新型木聚糖酶获得了高效分泌表达,为进一步分离纯化,研究其性质、结构和功能奠定了基础.