褐藻胶裂解酶基因的克隆、表达载体构建以及表达条件的研究

• 作者: 刘航 岳敏 张建平 曹海龙 李曙光 杜昱光
• 来源期刊: 华中师范大学学报（自然科学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: 褐藻胶裂解酶 aly基因 pET23b(+)克隆 Escherichia coli表达
• 年，卷（期）: 2012,（4）
• 页码范围: 456-460,467
• 分类号: Q815
• 字数: 3603字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-1190.2012.04.018

摘要

以产褐藻胶裂解酶的紫色链霉菌(Streptom yces violaceoruber)为出发菌株,应用基因工程技术,将褐藻胶裂解酶aly基因进行克隆,并构建了该基因的重组表达载体pET23b(+)-aly.通过表达条件的初步优化,实现了aly基因在大肠杆菌Escherichia coli BL21(DE3)中的成功表达.在IPTG诱导浓度为0.1mmol/L,诱导时间为8h,诱导温度为16℃的条件下,细胞破壁后上清中ALY粗酶液活力为6 U/mg.根据褐藻胶裂解酶ALY的蛋白质结构预测结果推断该酶属于Alginate lyase-2家族,理论pI为8.85,理论分子量大小为28 500,化学式为C1252N1920H356O394S9.SDSPAGE蛋白电泳检测发现,ALY蛋白的分子量约为28000,与预测的蛋白分子量较为接近.