Flag标签MORC2-677丝氨酸位点突变载体构建及表达

• 作者: 宋艳艳 李丰 王孝会 王桂玲 程正国
• 来源期刊: 生命科学研究
• 学科: 生物学
• 关键词: MORC2 突变体 真核表达载体 基因表达 胃癌细胞
• 年，卷（期）: 2012,（1）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 1-5
• 分类号: Q291
• 字数: 4317字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1007-7847.2012.01.001

摘要

构建Flag标签pcDNA3.1-MORC2的677丝氨酸位点突变重组质粒并完成在SGC-7901细胞中表达,更好地研究677丝氨酸位点所发生的功能.首先,构建含有Kpn Ⅰ和Xho Ⅰ酶切位点Flag标签的pcDNA3.1空载体；再以含有Kpn Ⅰ和Xho Ⅰ酶切位点的pcDN A3.1A-MORC2-WT野生型质粒为模板,在S677突变位点两侧设计重叠突变引物,进行三轮重叠延伸PCR完成定点突变,获得MORC2全长编码序列的S677位点的定点突变体载体(pcDNA3.1A-MORC2-S677A/S677E)；再通过Kpn Ⅰ和Xho Ⅰ酶切把pcDNA3.1A-MORC2-WT/S677A/S677E各载体定向克隆到已构建好的pcDNA3.1-Flag空载体中,酶切鉴定及测序正确后,转染到SGC-7901细胞中,利用Flag-标签抗体,Western blot检测其各突变载体的表达.成功构建了人Flag标签MORC2全长编码序列5677位点突变体真核表达载体并在SGC-7901细胞中获得带Flag标签融合蛋白表达产物,为进一步研究MORC2的功能奠定了基础.