携带FLAG标签的人BTG2真核表达载体的构建及其在HeLa细胞中的表达

• 作者: 洪梅 王志平 贺振华 赵金匣 郭琦 陶燕
• 来源期刊: 吉林大学学报（医学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: B细胞易位基因 2 抑癌基因 FLAG标签 真核表达载体 融合蛋白
• 年，卷（期）: 2014,（6）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 1149-1154
• 页数: 6页
• 分类号: Q291
• 字数: 4222字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13481/j.1671-587x.20140605

摘要

目的：构建人 B细胞易位基因2（BTG2）真核表达载体，并在 H eLa细胞中表达携带 FLAG标签的BTG2蛋白，为阐明BTG2基因的功能提供实验工具。方法：利用 PCR法获得全长 BTG2片段，将扩增得到的片段插入真核细胞表达载体 pcDNA3.1（＋）的多克隆位点；然后按照 FLAG序列设计并合成寡核苷酸片段，插入 pcDNA3.1（＋）-BTG2载体，构建 pcDNA3.1（＋）-FLAG-BTG2载体；将以上重组质粒转染 HeLa细胞，将细胞分为转染 pcDNA3.1（＋）空载体组、转染 pcDNA3.1（＋）-BTG2组和转染 pcDNA3.1（＋）-FLAG-BTG2组，采用抗 FLAG抗体的 Western blotting法，检测 FLAG-BTG2融合蛋白在 HeLa细胞中的表达水平。结果：将全长BTG2片段链接于 pcDNA3.1（＋）质粒，经限制性核酸内切酶BamH Ⅰ酶切分析及 DNA测序证实载体序列准确；该载体转染 HeLa细胞后用抗 FLAG 抗体进行 Western blotting 法检测，在空载体组和 pcDNA3.1（＋）-BTG2组 HeLa细胞中检测不到 FLAG 融合蛋白的表达，而在转染 pcDNA3.1（＋）-FLAG-BTG2组中检测到FLAG-BTG2融合蛋白的表达。结论：成功构建了 pcDNA3.1（＋）-FLAG-BTG2真核表达载体，并能在 HeLa细胞中有效表达携带 FLAG标签的BTG2蛋白。