基于lolB基因的SYBR Green Ⅰ实时定量PCR检测病原霍乱弧菌方法的建立

• 作者: 姚东瑞 张晓君 梁利国 毕可然 秦蕾 阎斌伦
• 来源期刊: 渔业科学进展
• 学科: 化学
• 关键词: 霍乱弧菌 lolB基因 SYBR Green Ⅰ Real-time PCR
• 年，卷（期）: 2012,（2）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 104-110
• 分类号: O657.79
• 字数: 4646字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-7075.2012.02.016

摘要

基于霍乱孤菌lolB基因保守序列设计1对特异性引物,建立了SYBR Green Ⅰ实时定量PCR检测霍乱弧菌的方法.常规PCR检测仅霍乱弧菌扩增出大小为519bp的目的片段,其他3种病原弧菌均为阴性；SYBR Green Ⅰ实时定量PCR,在Tm为86.5～87℃,扩增产物的熔解曲线只出现1个单特异峰,无引物二聚体,表明该引物具有较好的特异性.SYBR Green Ⅰ实时定量PCR扩增曲线反映了PCR的指数增长阶段和平台阶段；所制作的标准曲线在2.59×108～2.59×100拷贝数之间有较好的线性关系,相关系数为0.993,能对霍乱弧菌进行准确的定量分析.该方法检测时间从核酸抽提到结果分析仅需4～5 h,较传统方法敏感、操作简单、耗时短,是霍乱弧菌引起的水产动物疾病的快速诊断及流行病调查的有效方法.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	阎斌伦	淮海工学院海洋学院江苏省海洋生物技术重点实验室	264	2463	24.0	36.0
2	张晓君	淮海工学院海洋学院江苏省海洋生物技术重点实验室	45	582	14.0	22.0
3	梁利国	淮海工学院海洋学院江苏省海洋生物技术重点实验室	10	107	6.0	10.0
4	秦蕾	淮海工学院海洋学院江苏省海洋生物技术重点实验室	34	336	10.0	17.0
5	姚东瑞	淮海工学院海洋学院江苏省海洋生物技术重点实验室	29	197	10.0	12.0
6	毕可然	淮海工学院海洋学院江苏省海洋生物技术重点实验室	25	202	8.0	13.0