Jα33基因工程蛋白与多克隆抗体的制备及初步应用

• 作者: 何玉玲 吴孟君 彭姝 王梅 肖睿璟 谭锦泉 郑小玲 郑颖城
• 来源期刊: 现代免疫学
• 关键词: MAIT细胞 抗体制备
• 年，卷（期）: 2012,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 365-370
• 页数: 6页
• 语种: 中文

摘要

为了获得同时识别人类和小鼠MAIT细胞的特异性抗体,我们制备了MAIT细胞TCRα链Jα33融合蛋白及其抗体,为MAIT细胞在炎症性肠道疾病(IBD)中作用的研究提供有利的工具.用Jα33的全长序列为引物经PCR扩增Jα33串联体,扩增的串联体片段连接进入T载体,阳性克隆转入pGEX-4T-1表达载体中原核表达GST-Jα33融合蛋白,纯化后的融合蛋白免疫新西兰大白兔制备anti-Jα33多克隆抗体.并分别用Western blot和RT-PCR检测IBD模型小鼠MAIT细胞Jα33的表达.成功获得分子量约为38 kD的融合蛋白,免疫大白兔后得到抗Jα33的多克隆抗体,Western blot结果显示Jα33多克隆抗体能检测到人外周血单个核淋巴细胞表面Jα33的表达,而HeLa中则无Jα33的表达；MAIT细胞Jα33在IBD小鼠肠组织中表达量明显低于正常对照.成功制备了能同时识别人类和小鼠MAIT细胞Jα33的多克隆抗体,为研究MAIT细胞的定位和功能开启了方便之门.