烟草叶片全长cDNA文库构建及EST序列分析

• 作者: 孙玉合 解敏敏 龚达平
• 来源期刊: 中国农业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 烟草 全长cDNA文库 表达序列标签 功能注释
• 年，卷（期）: 2012,（9）
• 所属期刊栏目: 作物遗传育种·种质资源·分子遗传学
• 页码范围: 1696-1702
• 分类号: S435.621.2
• 语种: 中文
• DOI: 10.3864/j.issn.0578-1752.2012.09.004

摘要

[目的]构建烟草叶片全长cDNA文库并测序,发掘与烟叶发育、代谢和抗逆相关的基因,为进一步研究功能基因奠定基础,[方法]以烟草苗期叶片为试验材料,利用改进的Cap-trapper法构建烟草叶片全长cDNA文库.利用测序技术获得大量的EST序列,采用生物信息分析手段,对所测EST进行拼接和功能注释.[结果]构建了烟草叶片的全长cDNA文库,该文库滴度为1.2x106pfu·mL-1,平均插入片段在1.4kb左右.利用该文库测序了5280个克隆,获得5233条高质量表达序列标签(EST),序列拼接出3922个单一基因；同源比对分析表明,89.7％的基因与已知功能基因具有较高的同源性,这些基因涉及细胞生长、信号转导、翻译合成、抗逆反应和能量代谢等功能；并详细鉴定了部分与烟碱合成和抗病相关的基因.[结论]通过Cap-trapper法成功构建了高质量的烟草幼苗叶片全长cDNA文库；大规模EST测序分析挖掘到大量与烟草幼苗叶片发育、抗逆、抗病、烟碱代谢相关的候选基因.