无标签NT-proBNP重组蛋白的获得及多克隆抗体的制备

• 作者: 刘宇思 尹一兵 张雪梅 徐绣宇 曾令斌 胥文春 谌海兰 谢佳瑛 赵家宁 陈曦 陈特
• 来源期刊: 临床检验杂志
• 学科: 医学
• 关键词: N末端B型钠尿肽原 原核表达 蛋白质纯化 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2012,（11）
• 所属期刊栏目: 基础实验诊断研究
• 页码范围: 902-905
• 页数: 4页
• 分类号: R541.6
• 字数: 3908字
• 语种: 中文

摘要

目的 通过原核表达,获得不带标签的NT-proBNP重组蛋白,并用其免疫新西兰大白兔,制备兔抗NT-proBNP抗体.方法 从重组菌pET-32a(+)-NT-proBNP提取重组质粒,通过PCR扩增出目的DNA片段,插入pCold TF载体,转化入大肠埃希菌BL21 (DE3),经IPTG诱导表达融合蛋白.经镍柱亲和纯化、HRV 3C蛋白酶酶切、镍柱亲和纯化,制备不带标签的纯蛋白质,并用临床商品化试剂盒验证其抗原性.用该蛋白质免疫新西兰大白兔制备抗体,western blot鉴定其特异性.结果 成功获得高纯度的不带标签的NT-proBNP蛋白,该蛋白质能被商品化的试剂盒识别.用该蛋白质免疫新西兰大白兔成功制备出高效价高特异的抗体.结论 成功制备高纯度的无标签NT-proBNP蛋白及其多克隆抗体,为NT-proBNP在临床上的广泛应用奠定了基础.