新型隐球菌Cap10蛋白的重组表达及多克隆抗体制备

• 作者: 于虹 佟双 周育森 寇志华 杨裔 王欣 高基民
• 来源期刊: 中国卫生检验杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 新型隐球菌 荚膜相关蛋白10(Cap10) B细胞表位 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2012,（6）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 1229-1231,1236
• 页数: 4页
• 分类号: R446.5
• 语种: 中文

摘要

目的:重组表达新型隐球菌Cap10蛋白并制备特异抗体,为新型隐球菌的检测和诊断提供特异抗原和抗体.方法:选择CAP1O基因开放阅读框架(ORF)抗原表位集中、保守性高的片段,经过大肠杆菌偏嗜的密码子优化后进行基因合成,将目的片段克隆至原核表达载体pQE30中构建重组蛋白表达载体pQE30-CAP10并鉴定,IPTG诱导重组蛋白在M15中表达,并用SDS-PAGE和Western blot鉴定;镍柱纯化后,免疫家兔制备抗血清.结果:在大肠杆菌中成功表达Cap10,其纯度大于95％;二免后家兔血清抗体效价达到200万以上.结论:获得了高纯度的Cap10蛋白及高效价的多克隆抗体,为新型隐球菌的检测和致病机制研究奠定了基础.