抗甲胎蛋白单链抗体在大肠杆菌中表达条件的优化及活性鉴定

• 作者: 冯丽亚 吕海丽 姬晓南 张瑜 高向东
• 来源期刊: 中国药科大学学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 甲胎蛋白 单链抗体 表达 E.coli BL21(DE3) pET32a
• 年，卷（期）: 2012,（5）
• 所属期刊栏目: 论文
• 页码范围: 460-465
• 页数: 6页
• 分类号: Q786
• 字数: 5051字
• 语种: 中文

摘要

将抗甲胎蛋白单链抗体(scFv-AFP)基因克隆至载体pET32a,转入大肠杆菌E.coli BL21(DE3),在不同的诱导剂浓度、诱导温度和时间下诱导pET32a-scFv-AFP表达,SDS-PAGE分析表明37℃培养4h时加入0.4 mmol/L异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导5h为最适表达条件,目的蛋白表达量约为总蛋白的50％,其产物以包涵体形式存在.利用稀释法和透析法对包涵体复性,复性率为37.38％,活性蛋白产量达到200 mg/L.竞争抑制ELISA法初步鉴定活性,当scFvAFP与亲本单抗浓度比为16∶1,竞争ELISA抑制率达到54.13％,说明scFv-AFP具有较好的抗原结合特异性.该研究为scFv-AFP的获得与抗体的进一步应用改造奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张瑜	中国药科大学生命科学与技术学院	11	26	3.0	5.0
2	高向东	中国药科大学生命科学与技术学院	188	1604	21.0	30.0
3	吕海丽	中国药科大学生命科学与技术学院	1	5	1.0	1.0
4	姬晓南	中国药科大学生命科学与技术学院	4	6	1.0	2.0
5	冯丽亚	中国药科大学生命科学与技术学院	3	5	1.0	2.0