大鼠ferroportin1过表达慢病毒载体构建及其转染PC12细胞

• 作者: 冯俊生 林凌 林清 王玮 赵小贞
• 来源期刊: 神经解剖学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: FP1 慢病毒载体 转染 PC12细胞 大鼠
• 年，卷（期）: 2012,（2）
• 所属期刊栏目: 原著
• 页码范围: 157-163
• 分类号: R742.5
• 语种: 中文

摘要

目的:构建含大鼠ferroportin 1(FP1,膜铁转运蛋白1)基因和EGFP(绿色荧光蛋白)基因的过表达慢病毒载体并转染PC12细胞.方法:化学合成含有目的基因FP1的质粒,将酶切获得的目的基因连接人线性化慢病毒载体,构建重组质粒PGC-FU-FP1并进行测序鉴定；鉴定正确的阳性克隆采用Lipofectamine2000转染293T细胞,通过荧光显微镜和Western Blot检测FP1表达情况；在脂质体介导下将PGC-FU-FP1、pHelper1.0和pHelper2.0三质粒系统共转染入293T细胞,包装产生慢病毒,并通过实时荧光定量PCR法检测病毒滴度.以重组慢病毒载体质粒PGC-FU-FP1转染PC12细胞,荧光显微镜下观察EGFP的表达,实时荧光定量PCR和Western Blot法分别检测FP1mRNA和蛋白表达情况.结果:FP1基因序列经测序后与GeneBank报道的序列完全一致；重组质粒PGC-FU-FP1中携带有正确的FP1基因并能在293T细胞中表达；病毒滴度为2×108 TU/ml.荧光显微镜、实时荧光定量PCR和Western Blot法证实目的基因FP1能被重组慢病毒高效导入PC12细胞并得到过表达.结论:成功构建携带FP1基因的慢病毒载体,并获得FP1基因修饰的PC12基因工程细胞.为进一步研究FP1在帕金森病中的作用及基因治疗奠定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王玮	福建医科大学基础医学院人体解剖学与组织胚胎学系	156	843	15.0	22.0
5	林清	福建医科大学基础医学院人体解剖学与组织胚胎学系	17	26	3.0	4.0
6	赵小贞	福建医科大学基础医学院人体解剖学与组织胚胎学系	40	314	10.0	16.0
10	林凌	福建医科大学基础医学院人体解剖学与组织胚胎学系	15	48	3.0	6.0
14	冯俊生	福建医科大学基础医学院人体解剖学与组织胚胎学系	4	8	1.0	2.0