小鼠烟酰胺N-甲基转移酶基因的克隆及其表达

• 作者: 常平安 常新荣 陈玉英
• 来源期刊: 中南医学科学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 烟酰胺N-甲基转移酶 表达质粒 编码cDNA 细胞定位
• 年，卷（期）: 2012,（5）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 457-460,464
• 分类号: Q78
• 字数: 2728字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.2095-1116.2012.05.006

摘要

目的 克隆和表达小鼠烟酰胺N-甲基转移酶(NNMT)基因.方法 设计特异引物,利用逆转录PCR克隆小鼠NNMT编码cDNA序列,并进行序列测定;然后通过PCR扩增,双酶切回收cDNA片段定向重组到载体pEGFP-N3中,采用PCR和酶切鉴定重组表达质粒;最后将其转染到真核细胞中,通过Western杂交检测其表达,用激光共聚焦显微镜检测其细胞分布.结果经RT-PCR获得了小鼠NNMT的编码cDNA序列,经测序证实克隆序列完全正确;PCR和酶切鉴定表明绿色荧光蛋白(GFP)标记的NNMT表达质粒pNNMT-GFP成功构建;转染至HEK293T细胞中,Western杂交检测到绿色荧光蛋白融合的NNMT特异表达,显微观察表明NNMT分布在细胞质中.结论成功构建了NNMT的表达质粒,并在小鼠中实现其表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	常平安	重庆邮电大学生物信息学院	28	68	5.0	6.0
2	陈玉英	重庆邮电大学生物信息学院	19	87	5.0	8.0
3	常新荣	广西柳钢医院神经内科	2	23	2.0	2.0