人THAP11基因RNAi慢病毒表达系统的建立

• 作者: 孔祥祯 尹荣华 李长燕 杨晓明 詹轶群 郑巍薇
• 来源期刊: 军事医学
• 学科: 医学
• 关键词: THAP11 RNA干扰 慢病毒 细胞系 人造血干细胞
• 年，卷（期）: 2012,（11）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 825-829
• 分类号: R373
• 字数: 4058字
• 语种: 中文

摘要

目的 构建人THAP11基因RNA干扰(RNAi)慢病毒载体,制备高滴度病毒颗粒,敲低K562细胞和脐带血CD34+细胞中THAP11表达.方法 采用第三代慢病毒包装系统,将含有特异性干涉THAP11 的DNA序列克隆入穿梭质粒pSicoR中,构建siTHAP11-pSicoR质粒.在脂质体介导下,siTHAP11-pSicoR与包装质粒pLP1,pLP2,pLP/VSVG 共转染HEK293T细胞,获得高滴度慢病毒颗粒.感染K562细胞,检测内源THAP11敲低效果.感染人CD34+细胞,流式分选GFP阳性细胞,检测原代细胞中THAP11的敲低效果.结果 成功构建针对THAP11两个位点的RNAi慢病毒载体siTHAP11-1和siTHAP11-2并获得慢病毒颗粒,病毒滴度检测可达1.8×108 TU/ml.感染K562细胞后建立稳定株,THAP11的蛋白水平和mRNA水平均有下调.感染CD34+细胞效率达30%以上,siTHAP11-1可下调THAP11mRNA约80%,siTHAP11-2约下调85%.结论 成功构建THAP11的RNAi慢病毒载体,包装后的病毒颗粒可有效敲低细胞株及原代细胞中内源性THAP11的表达,为后续研究THAP11对CD34+细胞的影响奠定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	杨晓明	军事医学科学院放射与辐射医学研究所	88	536	11.0	19.0
2	詹轶群	军事医学科学院放射与辐射医学研究所	36	155	5.0	11.0
3	李长燕	军事医学科学院放射与辐射医学研究所	23	130	5.0	11.0
4	尹荣华	军事医学科学院放射与辐射医学研究所	5	6	2.0	2.0
5	孔祥祯	天津大学制药工程系	3	5	2.0	2.0
6	郑巍薇	军事医学科学院放射与辐射医学研究所	3	4	1.0	2.0