mLST8在大肠杆菌中的表达、纯化及鉴定

• 作者: 何秀云 朱传智 石炳毅 赵雅贞 郝娟 黄香玉
• 来源期刊: 生物技术通讯
• 学科: 生物学
• 关键词: mLST8 原核表达 纯化 肽指纹质谱 圆二色谱
• 年，卷（期）: 2012,（4）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 493-496
• 分类号: Q78
• 字数: 3157字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-0002.2012.04.006

摘要

目的:表达并纯化mLST8蛋白.方法:PCR扩增mLST8的编码cDNA,克隆到pET-28a(+)表达载体,将重组质粒pET-28a-mLST8转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,在IPTG诱导下表达目的蛋白；提取包涵体,用Ni2+亲和层析纯化目的蛋白,稀释和透析相结合进行复性,对复性蛋白进行阴离子交换层析、分子筛层析,将纯的复性mLST8进行肽指纹质谱鉴定和圆二色谱分析.结果:酶切和DNA测序证明pET-28a-mLST8表达质粒构建无误,并在大肠杆菌中得到高效表达；通过Ni2+亲和层析、复性、离子交换层析和分子筛层析获得了较高纯度的复性蛋白,肽指纹质谱鉴定为mLST8;mLST8蛋白的二级结构[α螺旋为18.2％,β折叠为52.3％(其中平行结构为12.1％,反向平行结构为40.2％),β转角为20.7％,无规则卷曲为39.9％]表明其为典型的β折叠结构.结论:在大肠杆菌中表达了重组mLST8蛋白,复性获得了二级结构准确的mLST8,为进一步研究mLST8的晶体结构与功能奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	何秀云	西南大学生命科学学院	20	120	6.0	10.0
3	朱传智	西南大学生命科学学院	1	0	0.0	0.0
4	郝娟	解放军第三○九医院器官移植与免疫调节北京市重点实验室	3	5	1.0	2.0
5	黄香玉	解放军第三○九医院器官移植与免疫调节北京市重点实验室	5	14	3.0	3.0
6	赵雅贞	解放军第三○九医院器官移植与免疫调节北京市重点实验室	3	5	1.0	2.0