GST-hCAP融合蛋白表达载体的构建及其在原核细胞中的表达

• 作者: 付勤 李妍 梁爽 沈涛 薛峰 许晓军
• 来源期刊: 东南大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: c-Cbl相关蛋白 原核表达 融合蛋白
• 年，卷（期）: 2012,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 24-28
• 分类号: Q257|R-33
• 字数: 3302字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-6264.2012.01.005

摘要

目的:构建GST标签的人c-Cbl相关蛋白(GST-hCAP)融合蛋白表达载体,并在大肠埃希菌(E.coli)中诱导其表达.方法:从COS-1细胞中提取mRNA,反转录为cDNA.用PCR方法扩增出hCAP基因全长,通过EcoRⅠ和XhoⅠ酶切位点将其定向插入pGEX-5X-1载体中,构建原核表达质粒pGEX-5X-1-hCAP,并转化E.coli DH5α,通过限制性内切酶酶切电泳和DNA测序鉴定正确后,转入E.coli BL21中,经异丙基硫代β-D半乳糖苷大量诱导表达,SDS-PAGE电泳和Western blot鉴定.结果:酶切电泳及测序结果证明,原核表达质粒GST-hCAP构建成功,用Western blot方法也证实了GST-hCAP融合蛋白的表达.结论:成功地构建了GST-hCAP原核表达载体,证实了其在原核细胞大肠埃希菌中的表达,为进一步纯化CAP及研究其结构与功能提供了前提基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	付勤	中国医科大学附属盛京医院骨科	182	1030	16.0	22.0
2	沈涛	中国医科大学附属盛京医院骨科	27	129	5.0	11.0
3	许晓军	中国医科大学附属盛京医院骨科	34	177	8.0	11.0
4	薛峰	中国医科大学附属盛京医院骨科	8	12	2.0	3.0