巨噬细胞LRG47/EBP50真核共表达质粒的构建及表达鉴定

• 作者: 方乐 李俊明 罗清
• 来源期刊: 武汉大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 结核分枝杆菌 LRG47 EBP50 共表达
• 年，卷（期）: 2012,（4）
• 所属期刊栏目: 基础医学研究
• 页码范围: 470-474
• 分类号: R378.91+1
• 语种: 中文

摘要

目的:构建能共表达LRG47和EBP50的重组质粒pBud-LE,实现目的基因LRG47、EBP50在真核细胞中的表达,以便于后续从分子和细胞水平研究其抗结核分枝杆菌(Mtb)感染的效果和机制.方法:用RT-PCR方法从RAW264.7细胞中扩增获得小鼠的lrg47基因和ebp50基因,分步克隆入真核共表达质粒pBUDCE4.1中,构建真核共表达质粒pBud-LE.同时构建ebp50和红色荧光蛋白表达基因(rfp)的融合基因,置换pBud-LE中的ebp50基因,构建共表达LRG47和EBP50-RFP的重组质粒pBud-LER;将pBud-LE、pBud-LER通过脂质体转染入293T细胞,以pBud-LER转染观察转染效果,再分别采用RT-PCR和免疫印迹法鉴定质粒在真核细胞系中表达LRG47和EBP50的能力.结果:成功构建了真核共表达质粒pBud-LE和pBud-LER;转染293T细胞后,LRG47和EBP50在RNA水平和蛋白水平都明显升高.结论:成功的构建了真核共表达质粒pBud-LE.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李俊明		59	158	8.0	10.0
2	罗清		48	89	6.0	7.0
3	方乐		9	39	4.0	6.0