Mmu-miR-34c慢病毒表达载体构建及在奶山羊雄性生殖干细胞的表达

• 作者: 于萌 刘超 华进联 朱海鲸 李明昭
• 来源期刊: 中国农业科学
• 学科: 农学
• 关键词: miR-34c 慢病毒载体 雄性生殖干细胞 奶山羊
• 年，卷（期）: 2012,（16）
• 所属期刊栏目: 兽医
• 页码范围: 3414-3421
• 分类号: S1
• 语种: 中文
• DOI: 10.3864/j.issn.0578-1752.2012.16.022

摘要

[目的]用两种方法构建miR-34c的慢病毒表达载体,并包装成慢病毒颗粒,为经济、高效的进行miR-34c超表达提供方案,为进一步研究miR-34c的作用奠定基础.[方法]从小鼠基因组中扩增miR-34c前体,分别插入pLL3.7的CMV启动子起始的GFP之后或U6启动子后,构建成载体pLL3.7-CMV-34c及pLL3.7-U6-34c.将重组慢病毒载体和包装质粒混合物转染包装细胞293T细胞,包装产生慢病毒颗粒,测定病毒滴度.感染293T细胞与关中奶山羊雄性生殖干细胞,用293T细胞与奶山羊雄性生殖干细胞的GFP表达程度测定转染效率,用定量PCR方法测定miR-34c的表达效率.[结果]重组质粒酶切及PCR分析及转化菌液测序,证明插入序列正确,qPCR检测显示:miR-34c的表达在慢病毒载体感染的293T细胞与关中奶山羊雄性生殖干细胞均显著上调.[结论]用pLL3.7慢病毒载体中的CMV和U6两种启动子均可经济高效地进行miR-34c超表达,且由U6启动子启动的miR-34c慢病毒表达载体可以成功高效感染关中奶山羊雄性生殖干细胞.