引入易错PCR和DNA-shuffling技术构建单链抗体库

• 作者: 杨浩 杨青平 查成喜 韩跃武
• 来源期刊: 基础医学与临床
• 学科: 医学
• 关键词: 易错PCR DNA-shuffling 单链抗体库
• 年，卷（期）: 2012,（1）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 56-60
• 分类号: R392.11
• 字数: 3008字
• 语种: 中文

摘要

目的 引入易错PCR和DNA-shuffling技术构建高库容量的单链抗体库.方法 收集不同年龄、性别、健康状态的人的静脉血各5 mL,提取单个核细胞总RNA,反转录为cDNA,PCR扩增VH和VL基因,应用易错PCR对VH和VL基因进行突变,同时用DNA-shuffling技术对全长单链抗体基因进行体外改组,获得的分子与T载体连接,转化E.coli DH5α,选取阳性克隆,经菌落PCR后酶切鉴定抗体库多样性,计算分析单链抗体库容量.结果 成功构建了库容量为4.37×1013的单链抗体库,经酶切鉴定,初步判定抗体库多样性良好.结论 引入易错PCR和DNA-shuffling技术,成功构建了单链抗体库,为后续筛选高亲和力抗体奠定了实验基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	韩跃武	兰州大学基础医学院	44	138	6.0	8.0
2	杨浩	兰州大学基础医学院	6	23	4.0	4.0
3	杨青平	甘肃省第三人民医院内分泌科	13	26	3.0	4.0
4	查成喜	兰州大学基础医学院	4	14	3.0	3.0