靶向ADAM17基因RNA干扰慢病毒载体的构建及慢病毒包装

• 作者: 严建平 任卓超 李亚清 王宏 许武林 陈瑜
• 来源期刊: 中国微生态学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 解整合素-金属蛋白酶17 RNA干扰 慢病毒
• 年，卷（期）: 2012,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 389-393,399
• 分类号: Q78
• 语种: 中文

摘要

目的 构建靶向ADAM17基因RNA干扰(RNAi)慢病毒载体及包装慢病毒.方法 根据人ADAM17mRNA序列设计4个靶序列,合成4对寡核苷酸序列,同时合成1对阴性对照寡核苷酸序列；将以上5对寡核苷酸序列退火后连入pLVTHM质粒,经酶切和测序鉴定.将重组慢病毒质粒转染至A549细胞,以Real-time PCR检测A549细胞中ADAM17 mRNA表达.将干扰效果最佳的质粒载体和包装质粒共转染至293T细胞,包装产生病毒颗粒.以流式细胞术检测重组慢病毒的滴度.结果 酶切和测序证实干扰靶序列已被准确克隆到pLVTHM质粒载体.pLVTHM-ADAM17-siRNA1-4均可显著抑制A549细胞ADAM17 mRNA的表达,其中pLVTHM-ADAM17-siRNA4的抑制效果最佳.LV-ADAM17-siRNA4重组慢病毒的滴度为2.16×108 TU/ml.结论 成功构建了靶向人ADAM17基因RNAi慢病毒载体及包装了重组慢病毒.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	严建平	浙江省人民医院呼吸内科	36	242	9.0	13.0
2	许武林	浙江省人民医院呼吸内科	17	98	5.0	9.0
3	李亚清	浙江省人民医院呼吸内科	25	109	6.0	9.0
4	王宏	浙江省人民医院呼吸内科	12	62	4.0	7.0
5	任卓超	浙江省人民医院呼吸内科	11	44	4.0	6.0
6	陈瑜	浙江省人民医院呼吸内科	5	16	2.0	3.0