抗人γδ TCR单链抗体G5-4ScFv的制备及生物学功能分析

• 作者: 何维 崔莲仙 郑静
• 来源期刊: 基础医学与临床
• 学科: 医学
• 关键词: γδTCR 单链抗体 原核表达 生物学功能
• 年，卷（期）: 2012,（5）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 525-532
• 分类号: R392.11
• 字数: 4477字
• 语种: 中文

摘要

目的 构建并应用原核表达体系表达能体外刺激人γδ T细胞增殖的抗人γδ TCR单链抗体.方法 在成功建立稳定分泌鼠抗人γδTCR单克隆抗体杂交瘤细胞系G5-4的基础上,通过RT-PCR,扩增得到该单克隆抗体的重链(VH)和轻链(VL)可变区基因；通过搭桥PCR法,用连接肽(Gly4Ser)3,将VH和VL连接起来,构建了抗人γδ TCR单链抗体G5-4ScFv基因.将该基因插入原核表达载体pET22b(+),并在大肠杆菌TransB( DE3)中经IPTG诱导表达.通过SDS-PAGE,Werstern blot进行鉴定,并通过流式、固相扩增、细胞因子检测、杀伤检测等方法分析单链抗体G5-4ScFv的生物学功能.结果 单链抗体G5-4ScFv的相对分子质量约30ku,能与γδ TCR特异结合；固相化能刺激人PBMC中γδT细胞增殖,2周时其纯度可达90％；扩增得到的γδT细胞能有效杀伤肿瘤细胞系,如Daudi细胞,并在刺激时能有效分泌IFN-γ和TGF-α.结论 成功构建并表达了具有生物学活性的抗人γδ TCR单链抗体G5-4ScFv,为进一步研究其用于制备肿瘤过继免疫治疗用细胞制剂奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	何维	中国医学科学院基础医学研究所免疫学系	46	200	7.0	12.0
2	崔莲仙	中国医学科学院基础医学研究所免疫学系	16	41	4.0	5.0
3	郑静	中国医学科学院基础医学研究所免疫学系	1	0	0.0	0.0