稳定表达T7RNA聚合酶的猪睾丸细胞系的建立

• 作者: 刘学荣 刘斌 刘萍 杜平 武发菊 牟克斌 王凡 祁光宇 董金杰 黄银君
• 来源期刊: 东北农业大学学报
• 学科: 农学
• 关键词: T7RNA聚合酶 EGFP和RED荧光基因 猪睾丸细胞 ST/T7RNA细胞系
• 年，卷（期）: 2012,（12）
• 页码范围: 26-31
• 分类号: Q503|S828
• 字数: 3862字
• 语种: 中文

摘要

根据GenBank中登录的T7RNA聚合酶基因参考序列,设计合成了1对特异性引物扩增对T7RNA聚合酶基因进行扩增,将测序正确的T7RNA聚合酶基因和真核表达载体pIRES2-EGFP双酶切后进行连接构建pIRES2-EGFP-T7RNA RNA质粒.再将构建正确的pIRES2-EGFP-T7RNA质粒经用脂质体法转染猪睾丸细胞,通过G418筛选和单细胞克隆化,同时构建pET-32a-RED原核表达质粒载体,用其检测T7启动子控制下的红色荧光蛋白的表达.结果表明,建立的ST/T7RNA细胞系经20次传代仍然能稳定表达T7 RNA聚合酶.结果显示,成功建立能稳定表达T7 RNA聚合酶的猪睾丸细胞系,为猪瘟病毒反向遗传操作平台奠定了基础.