HBx、MHBst155真核表达载体构建及在HepG2细胞中的表达

• 作者: 康艳红 张绍全 杨林 胡朝霞 谢奇峰 高志良 麦丽
• 来源期刊: 热带医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: HBx MHBst155 GFP 细胞株 基因表达
• 年，卷（期）: 2012,（5）
• 所属期刊栏目: 硕博专栏论著
• 页码范围: 501-505,509,封3
• 分类号: R735.7
• 语种: 中文

摘要

目的 建立稳定、高效的HBx、羧基末端截短的中分子表面蛋白(MHBst)体外表达细胞株,以进一步研究HBx、MHBst蛋白在肝癌发生中的作用及其机理.方法 设计特异性引物,采用PCR方法从adr亚型HBV质粒pHBV DNA中扩增HBx、羧基末端截短至155位氨基酸的中分子表面蛋白(MHBst155)编码基因,并定向插入绿色荧光蛋白(GFP)表达载体pEGFP-C1的BglⅡ、Kpn Ⅰ和BglⅡ、BamH Ⅰ酶切位点,转化宿主菌DH5α,提取质粒,分别用上述内切酶酶切及DNA测序鉴定重组质粒.采用脂质体介导将空载体、重组质粒分别转染到人肝肿瘤细胞株HepG2中,G418筛选抗性细胞克隆,荧光显微镜下观察GFP表达,挑取表达GFP的抗性克隆扩大培养、传代.采用RT-PCR、蛋白印迹检测抗性细胞中HBx、MHBst155的mRNA及蛋白水平.结果 经酶切及测序鉴定成功构建了pGFP-HBx、pGFP-MHBst155重组表达载体,将空载体及重组质粒转染HepG2,经G418筛选约20 d获得抗性细胞克隆.将带有绿色荧光的抗性克隆扩大培养并经传代40次,细胞仍表达强的绿色荧光.RT-PCR及蛋白印迹检测表明转染重组体的HepG2/GFP-HBx、HepG2/GFP-MHBst155细胞有相应的条带,而空载体、空白对照组未出现条带.结论 成功构建了HBx、MHBst155真核重组表达载体pGFP-HBx、pGFP-MHBst155,获得了稳定表达融合蛋白GFP-HBx、GFP-MHBst155的HepG2细胞系,为进一步研究HBx及MHBst蛋白在肝癌发生中的作用及分子机制构建了良好的平台.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	杨林	中山大学附属第三医院感染病科	61	313	7.0	15.0
2	麦丽	中山大学附属第三医院感染病科	25	116	6.0	9.0
3	谢奇峰	中山大学附属第三医院感染病科	31	138	8.0	10.0
4	高志良	中山大学附属第三医院感染病科	202	1424	17.0	28.0
5	张绍全	中山大学附属第三医院感染病科	33	91	6.0	7.0
6	康艳红	中山大学附属第三医院感染病科	3	11	2.0	3.0
7	胡朝霞	中山大学附属第三医院感染病科	5	57	3.0	5.0