玉米叶面微生物DNA提取方法及PCR引物的筛选

• 作者: 孙红炜 李世国 李凡 田晓燕 赵辉 路兴波 颜世磊
• 来源期刊: 山东农业科学
• 学科: 生物学
• 关键词: 玉米 叶面微生物 DNA提取 PCR 16SrDNA 18SrDNA
• 年，卷（期）: 2012,（2）
• 所属期刊栏目: 生物技术·信息技术
• 页码范围: 9-14
• 分类号: Q503
• 字数: 4229字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1001-4942.2012.02.003

摘要

传统的微生物培养方法在反映叶面微生态信息上具有局限性,因此逐渐被分子生态学所代替,而获得高质量、大片段、无偏好的总DNA是研究叶面环境微生物的基础.本文采用改进的Sambrook法、CTAB法、改良的化学法以及试剂盒法对玉米生长初期、中期、末期的叶面微生物总DNA进行提取,并对4种方法提取的DNA片段的大小和产量进行综合评价.将得到的DNA用引物357/518以及984/1387对细菌16S rDNA进行扩增；用5种常见引物NS1/fung、ITSl - F/ITS2、NS1/AM1、EF4/fung5、SSU - 0817/SSU - 1196对真菌18SrDNA进行扩增.结果表明:4种方法提取的DNA片段均适用于PCR,但DNA的得率和纯度有一定差别,其中以试剂盒提取效果最好.PCR结果显示,除化学法外,其他3种方法提取的DNA均能够获得目的条带；并通过比较得出引物984/1387对16S rDNA以及ITS1 - F/ITS2对18S rDNA扩增效果较好且扩增量最大.